菌落計數器是一種用于快速統計瓊脂平板表面微生物菌落數量的儀器，廣泛應用于食品、醫藥、環境檢測等領域。以下是其工作原理及使用方法的詳細說明：

一、工作原理

1. 光學成像原理

• 多數現代菌落計數器采用高分辨率攝像頭或掃描儀，通過透射光（底部光源）或反射光（頂部光源）對瓊脂平板進行成像。

• 菌落與培養基的對比度（如顏色、透明度差異）被轉化為數字圖像。

2. 圖像分析算法

• 邊緣檢測：識別菌落的圓形或不規則輪廓。

• 閾值分割：通過設定灰度/顏色閾值區分菌落與背景（如深色菌落 vs 透明培養基）。

• 去噪處理：過濾微小氣泡、劃痕等干擾物。

• 自動計數：統計符合預設大小、形狀的菌落目標。

3. 手動輔助功能

• 部分儀器配備觸摸屏或點擊筆，允許用戶手動標記漏檢菌落或排除誤判目標。

二、使用方法

1. 儀器準備

• 校準：第一次使用前需用標準板校準計數精度。

• 光源調整：根據培養基透明度選擇背光（透射）或頂光（反射）模式。

• 軟件設置：設定菌落大小范圍（如0.1-5mm）、顏色閾值（適用于顯色培養基）。

2. 樣本處理

• 平板要求：菌落分布均勻，避免重疊或蔓延生長（若菌落過密需稀釋后重新培養）。

• 標記干擾物：用記號筆標出平板上的氣泡、雜質，防止誤計。

3. 計數操作步驟

1. 放置平板：將培養皿倒置（蓋朝下）放在計數平臺中心。

2. 圖像采集：關閉環境光源，啟動成像系統獲取清晰圖像。

3. 自動計數：軟件生成初步結果，顯示菌落位置標記（通常以彩色圈標示）。

4. 人工復核：

• 添加遺漏菌落：通過點擊未識別的菌落手動補計。

• 刪除誤計對象：剔除被誤判為菌落的雜質標記。

5. 保存數據：導出菌落數量、圖像及檢測參數（支持Excel/PDF格式）。

4. 清潔維護

• 消毒：用70%酒精擦拭計數平臺，避免交叉污染。

• 鏡頭保護：定期用鏡頭紙清潔攝像頭，防止灰塵影響成像。

三、注意事項

• 菌落重疊處理：若菌落重疊超過1/3，需手動分割或報告為"TFTC"（Too Few To Count）。

• 特殊培養基：如黑色背景的顯色培養基，需調整光源角度和軟件閾值。

• 驗證要求：依據行業標準（如ISO 7218）定期進行人工復核，確保誤差<5%。

四、常見問題解決

• 計數偏高：檢查閾值是否過低，或存在未過濾的氣泡。

• 計數偏低：確認菌落顏色與背景對比度，適當降低灰度閾值。

• 成像模糊：清潔培養皿底部污漬，調整焦距。

通過結合自動化技術與人工復核，菌落計數器顯著提高了檢測效率和準確性，尤其適用于大批量樣本分析。使用時需根據具體實驗需求靈活調整參數，并嚴格遵守無菌操作規范。